高产反式-4-羟脯氨酸重组大肠杆菌的构建和发酵优化

刘合栋, 江南大学 发表时间:2013-06-01 硕士

来源于指孢囊菌的脯氨酸4-羟化酶,可直接在游离的L-脯氨酸的第4位上加羟基,生成反式-4-羟脯氨酸。为了使脯氨酸4-羟化酶基因在大肠杆菌中得到高表达并实现L-脯氨酸高效转化,根据大肠杆菌密码子偏好性,重新设计合成了脯氨酸4-羟化酶基因。经密码子优化后的脯氨酸4-羟化酶基因与初始基因序列比较,脯氨酸4-羟化酶基因密码子适用指数CAI从初始的0.3992调整为0.9941,接近于最优值1,且GC百分比含量降低至59.34%。利用软件预测初步优化的脯氨酸4-羟化酶基因mRNA二级...


基于高光谱成像技术的鸡肉品质快速无损检测

熊振杰, 华南理工大学 发表时间:2015-04-25 硕士

...ctive substance,TBARS)和羟脯氨酸)、以及不同种类(传统土鸡与普通肉鸡)的快速检测及其品质图像可视化;同时本论文还在光谱预处理、建模方法、特征波长提取、图像纹理信息挖掘等高光谱数据处理方法进行了探索和创新,为实现鸡肉加工工业的精细生产和实时监控提供理论和技术支撑,具体研究内容和结果如下:(1)应用可见/短波近红外高光谱成像技术实现了对不同冷藏时间的鸡肉颜色(L*,a*,b*)和嫩度的快速预测。首先,从获取的高光谱图像中选取感兴趣区域并提取平均光谱。然后,...


大菱鲆幼鱼几种功能性氨基酸营养代谢的研究

张凯凯, 中国海洋大学 发表时间:2014-05-29 博士

...氨基酸代谢的调控机制;研究高植物蛋白饲料中添加羟脯氨酸脯氨酸对大菱鲆幼鱼生长和胶原蛋白代谢的影响。本文研究内容和主要研究结果如下:1.饲料中精氨酸和谷氨酰胺水平对大菱鲆幼鱼生长、非特异性免疫力、疾病抵抗力及精氨酸代谢的影响本实验旨在研究饲料中精氨酸(Arg)和谷氨酰胺(Gln)水平对大菱鲆幼鱼生长、非特异性免疫力、疾病抵抗力及精氨酸代谢的影响。以白鱼粉(23%)、豆粕(16%)和玉米蛋白粉(23%)为主要蛋白源配制出粗蛋白含量50%、粗脂肪含量12%的基础饲料,在基础饲料...


无外源L-脯氨酸产反式-4-羟脯氨酸大肠杆菌的构建及发酵优化

胡丹丹, 江南大学 发表时间:2015-06-01 硕士

反式-4-羟基-L-脯氨酸是L-脯氨酸羟基化后的产物,在医药、化工、食品、美容等行业中应用广泛。将微生物体内L-脯氨酸的生物合成途径与脯氨酸4-羟化酶催化的羟基化反应结合起来,在无外源L-脯氨酸的条件下直接从葡萄糖转化生成反式-4-羟脯氨酸,可以节约生产成本,充分利用微生物资源。首先,构建L-脯氨酸生物合成能力增强的重组大肠杆菌:通过全质粒PCR对克隆得到的pro BA中的pro B进行定点突变,突变的氨基酸位点是E143A、K145A;选择色氨酸串联启动子驱动突变基因的表...


产顺式-3-羟脯氨酸重组大肠杆菌的构建及发酵优化

姚雪娜, 江南大学 发表时间:2015-06-01 硕士

顺式-3-羟基-L-脯氨酸(顺式-3-羟脯氨酸)能够用于合成很多抗癌药物,具有重要的商业价值,但其在自然界中含量极为稀少,各国研究者都在寻找一种经济有效的获取顺式-3-羟脯氨酸的方法。来源于链霉菌TH1的脯氨酸-3-羟化酶可以直接在游离的L-脯氨酸第三位碳原子上加羟基,生成顺式-3-羟脯氨酸。本研究通过目的基因优化设计,重组大肠杆菌的构建,发酵优化等策略,使脯氨酸-3-羟化酶基因(P3H)在大肠杆菌中大量表达,实现L-脯氨酸高效转化为顺式-3-羟脯氨酸脯氨酸-3-羟化酶基...


高植物蛋白替代饲料不同水平鱼粉后添加羟脯氨酸对大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)幼鱼生长性能的影响

刘运正, 中国海洋大学 发表时间:2014-06-06 硕士

...物蛋白替代饲料中不同水平的鱼粉后,分别添加晶体羟脯氨酸,研究其对大菱鲆生长性能和肌肉质构等相关指标的影响。实验设计了7组等氮等能的饲料,以含鱼粉60%的饲料为对照组(FM),以小麦粉、豆粕、玉米蛋白、谷朊粉、花生粕和啤酒酵母按照一定比例混合作为复合植物蛋白分别替代其中40%(40I)、50%(50I)和60%(60I)鱼粉后作为其中三个处理组,另在三个替代水平饲料中分别添加了0.6%羟脯氨酸(Hyp)形成40IHyp、50IHyp和60IHyp三个处理组,实验共7个处理组。...


产反式-4-羟基-L-脯氨酸大肠杆菌菌株的改造及发酵条件初步研究

张胜利, 江南大学 发表时间:2015-06-01 硕士

反式-4-羟基-L-脯氨酸是自然界中分布最普遍的一种羟脯氨酸,在医药、化工、食品和美容业等领域均有广泛应用。本文以已构建好的反式-4-羟基-L-脯氨酸生产菌株——大肠杆菌BL21(DE3)/p UHT4为出发菌,在添加外源脯氨酸生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的前提下,对该菌进行菌种改造及发酵用培养基的优化,以期提高生产效率,降低生产成本。具体研究内容如下:在质粒p UHT4的基础上,构建出脯氨酸-4-羟化酶基因与透明颤菌血红蛋白基因(vgb基因)的共表达质粒p UHVT4,...


高效液相色谱法检测鲫鱼不同组织中的胶原蛋白含量

贡雯玉; 卞欢; 吴海虹; 王道营; 耿志明; 刘芳; 张牧焓; 徐为民; 诸永志, 食品科学 2015年14期 , 期刊

...液相色谱法对鲫鱼鱼皮、鱼肉、鱼鳞、鱼鳔组织中的羟脯氨酸含量进行检测,再将羟脯氨酸含量换算成相应胶原蛋白的含量。鲫鱼样品经盐酸110℃水解18 h,丹磺酰氯衍生,采用高效液相色谱-紫外法进行检测。色谱柱:反相C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:A为甲醇,B为四氢呋喃-甲醇-0.05 mol/L乙酸钠(1∶15∶84,V/V)溶液,采用梯度洗脱;流速1 m L/min;柱温40℃;检测波长254 nm。结果表明:羟脯氨酸在20~400μg/m L范围内呈现良...


南方根结线虫侵染对不同抗性番茄砧木渗调物质及羟脯氨酸含量的比较

贾双双; 徐坤, 草业学报 2015年07期 , 期刊

...侵染对不同抗性番茄砧木幼苗渗透调节物质及细胞壁羟脯氨酸含量的影响。研究表明,未接种南方根结线虫的番茄砧木幼苗,其根系与叶片可溶性糖、可溶性蛋白、脯氨酸等渗透调节物质与细胞壁羟脯氨酸含量变化并未因品种抗性不同而有显著差异(P>0.05);接种南方根结线虫后,渗透调节物质含量与细胞壁羟脯氨酸含量变化规律基本一致,均呈周期性升高,且坂砧2号升幅显著高于Ls-89(P<0.05)。据此认为,可溶性糖、可溶性蛋白、脯氨酸、细胞壁羟脯氨酸等物质的含量变化均与番茄砧木幼苗对南方根结线虫的...


脯氨酸-4-羟化酶在大肠杆菌中的密码子优化表达及对反式-4-羟脯氨酸生物合成的作用

刘合栋; 袁春伟; 张震宇, 生物加工过程 2014年06期 , 期刊

为了使脯氨酸-4-羟化酶基因在重组大肠杆菌中得到高表达,通过调整大肠杆菌密码子偏好性以及mRNA二级结构,使得脯氨酸-4-羟化酶基因得到优化。将优化后的脯氨酸-4-羟化酶基因插入含有色氨酸串联启动子的p UC19质粒,构建重组质粒p UC19-ptrp2-Hyp,并导入大肠杆菌BL21(DE3)中。在摇瓶水平,重组菌以L-脯氨酸为底物发酵8 h,可积累(0.492±0.034)g/L的反式-4-羟脯氨酸。在发酵罐水平,通过补料分批发酵来提高反式-4-羟脯氨酸的产量,当补糖速...


不同强度耐力运动对大鼠心房TGF-β1/miR-21信号途径的影响

王世强; 常芸; 马晓雯; 饶志坚, 体育科学 2015年11期 , 期刊

...度运动动物模型,研究不同强度耐力运动对大鼠心房羟脯氨酸含量的影响以及TGF-β1/miR-21信号途径的调节作用,为运动性心房纤颤的发生机制提供实验依据。方法:72只健康成年雄性SD大鼠随机分为安静组、中等强度组和大强度组,每组24只。分别进行8周、12周和16周运动,每周训练5天,休息2天,每次运动1h。运动8周、12周和16周后24h内处死取材摘取心脏,分离出右心房。采用酶联免疫法检测血清cTnI的含量;样本碱水解法检测羟脯氨酸的含量;荧光定量PCR检测TGF-β1和m...


羟脯氨酸对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠肠炎的缓解作用及机制

季昀, 中国农业大学 发表时间:2018-05-01 博士

...康已成为近年来动物营养学上关注的热点问题之一。羟脯氨酸(Hyp)是一种胶原蛋白和猪乳中含量丰富的氨基酸衍生物,现有证据表明Hyp可能对炎症和氧化应激具有一定的抵抗作用。本研究结合动物试验和体外培养的细胞试验,运用组织学、细胞与分子生物学技术,探究了Hyp对肠道的抗炎、抗氧化作用及其机制。试验一以葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的雄性C57BL/6肠炎小鼠为模型,研究了 Hyp对结肠炎的缓解作用。结果表明:2.5%DSS诱导的结肠炎小鼠表现为体重减轻、疾病活动指数(DAI)和组织学...


制革用含酶助剂的制备及性能研究

侯雪艳, 陕西科技大学 发表时间:2015-05-01 博士

制革业在畜牧业产业链和皮革制品产业挥着重要的作用。但是,制革过程中大量化工材料的使用会带来一定的环境污染,用环保皮革化工材料替代传统材料,是从源头解决制革污染的有效方法之一。作为一种生物催化剂,酶具有高效、专一、可降解性、无污染等特点,是实现清洁制革具有潜力的一种绿色材料,其在制革中的研究范围在不断扩大和深入。目前酶在制革中的研究缺乏针对不同工序皮的结构特征,系统研究酶的在皮中渗透过程,使得制革酶制剂的研发及应用控制具有盲目性。此外,酶在使用或保存过程中,易因外界条件的变


羟脯氨酸致大鼠肾损伤及肾结石模型建立

贺徐华, 桂林医学院 发表时间:2014-03-01 硕士

目的:确定在SD大鼠的模型中,羟基脯氨酸(HP)的饮食能否引起肾损伤和肾结石,以及对结石的成分进行分析。对结石的形成过程做初步的阐述。为进一步研究肾脏损伤机理和结石形成机理奠定实验基础。方法:将雄、雌性SD大鼠24只随机分为大剂量喂养的羟脯氨酸组19.1mmol/kg(2.5g/kg)、小剂量喂养的羟脯氨酸组9.6mmol/kg(1.25g/kg)和空白对照组(蒸馏水),采用灌胃的方法进行喂养4周。喂养前称量各组大鼠的体重,在停药时再次称量大鼠的体重,并且检测SD大鼠的血尿...


离子色谱法测定鱼鳞胶原蛋白中羟脯氨酸含量方法的研究

张怡评; 易瑞灶; 陈晖; 陈俊德; 陈思谨; 陆燕, 中国海洋药物 2011年04期 , 期刊

目的建立离子色谱法测定鱼鳞胶原蛋白中羟脯氨酸的含量,为工艺研究提供检测依据。方法采用Aminopac PA-10氨基酸分析柱,用积分安培离子色谱法测定鱼鳞中羟脯氨酸的含量。结果羟脯氨酸在0.32~32μmol.L-1(进样量25μL)的范围内呈良好线性关系(y=3.341 1x+1.0087,r=0.999,平均回收率98.25%,RSD=2.04% n=5)。结论所建立的方法稳定可行,可作为判断鱼鳞胶原蛋白含量的一个定量指标。...


羟脯氨酸的研究与开发

张自强; 赵东旭; 杨新林, 氨基酸和生物资源 2006年01期 , 期刊

羟脯氨酸平衡失调与疾病、检测方法与应用、生产工艺、展望等4个方面介绍了羟脯氨酸的研究与开发。...


重组大肠杆菌BL21(pUC19-Hyp)产羟脯氨酸的补料分批培养

袁春伟; 何艳春; 张胜利; 张震宇, 生物加工过程 2014年04期 , 期刊

... g/min恒速流加为最优,在发酵44 h时,羟脯氨酸的质量浓度达到最高,为42.50 g/L,脯氨酸转化率为81%,此时细胞干质量为21.33g/L,残糖质量浓度为0.17 g/L。L-羟脯氨酸含量与摇瓶发酵时的1.39 g/L相比,提高了大约30倍,比日本株式会社的发酵产量提高了1.50 g/L,发酵过程中糖酸转化率约为4.0∶1。发酵液中的氨基酸分析结果表明,除脯氨酸羟脯氨酸外的其他氨基酸质量浓度均低于0.1 g/L,发酵液中主要氨基酸为脯氨酸羟脯氨酸。...


生物转化法生产顺式-4-L-羟脯氨酸的研究

赵利维, 河北师范大学 发表时间:2016-03-21 硕士

顺式-4-L-羟脯氨酸(cis-4-Hydroxy proline,cis-4-Hyp)不属于20种常见的氨基酸,是L-脯氨酸被顺式-4-L-羟化酶羟基化修饰后的产物。顺式-4-L-羟脯氨酸是合成宜他霉素和微鞘藻素两种肽类抗生素的原料,并且临床上被认为可做为抗癌药物,因此cis-4-Hyp的生产和应用一直受到业界的广泛关注。目前,国外生产羟脯氨酸的有效生产方法是生物转化法,即利用脯氨酸羟化酶在Fe2+、α-酮戊二酸存在的介质中将底物L-脯氨酸转化为L-羟脯氨酸。本研究首先通...


生肌玉红膏对大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合过程中羟脯氨酸水平和胶原比例的影响

赵春霖; 王丽娟; 董小鹏; 于博, 中成药 2013年11期 , 期刊

...轻粉、白蜡、麻油等)对深Ⅱ度烧伤大鼠创面组织中羟脯氨酸水平及Ⅰ型和Ⅲ型胶原比例的影响。方法将深Ⅱ度烧伤大鼠按体质量分层随机分为模型组、生肌玉红膏组和湿润烧伤膏组,每组24只。烧伤创面分别给予相应药物外敷,直至创面愈合。观察各组创面愈合时间,烧伤后每隔7 d测定各组动物背部创面羟脯氨酸水平及Ⅰ型和Ⅲ型胶原比值的变化。结果与模型组相比,生肌玉红膏组创面愈合时间缩短(P<0.05);创面羟脯氨酸水平高于模型组(P<0.05);在创面修复的第14、21天,生肌玉红膏组Ⅰ型/Ⅲ型胶原...


丹参联合川芎嗪对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1表达及羟脯氨酸含量的影响

陈媛媛; 王文军; 郭芳; 范贤明; 陈菊屏; 湛晓勤, 时珍国医国药 2012年05期 , 期刊

...肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)表达及羟脯氨酸含量的影响。方法将90只成年雄性SD大鼠,随机分为6组:生理盐水(NS)组、BLM组、地塞米松(DM)组,中药干预组(A组、B组、C组)。NS组气管内灌注NS,BLM组、DM组及中药干预组(A组、B组、C组)气管内灌注BLM,随后NS组和BLM组每日腹腔注射NS,DM组每日腹腔注射DM,中药干预组(A组、B组、C组)每日给予不同剂量丹参和川芎嗪复合制剂腹腔注射,分别于气管内灌注药物后第7天,第14天和第28天处死每组大鼠...


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