活细胞在线监控L-羟脯氨酸补料发酵工艺的研究

蔡萌萌; 户红通; 刘子强; 徐庆阳; 陈宁, 食品与发酵工业 2018年05期 , 期刊

为了研究活细胞在线监控补料技术对L-羟脯氨酸发酵的影响,在30 L发酵罐上安装活细胞在线检测仪,实时监测发酵液中活细胞数量,根据活细胞数量调整补料策略,分析活细胞在线监控补料对L-羟脯氨酸发酵补糖速率、产量、糖酸转化率和代谢流量分布的影响。结果表明,采用活细胞在线监控补料发酵工艺生产L-羟脯氨酸的最佳补糖策略是在发酵中后期及时降低补糖速率,最终降到9 g/(L·h),L-羟脯氨酸产量提高了11.39%,乙酸积累量减少了48.69%,糖酸转化率提高了14.92%,糖酵解途径和...


羟脯氨酸的研究与开发

张自强; 赵东旭; 杨新林, 氨基酸和生物资源 2006年01期 , 期刊

羟脯氨酸平衡失调与疾病、检测方法与应用、生产工艺、展望等4个方面介绍了羟脯氨酸的研究与开发。...


L-羟脯氨酸-Zn(Ⅱ)的配合机制及其抗氧化性研究

左瑞雅; 周小华; 杜首英, 生物工程学报 2007年04期 , 期刊

以L-羟脯氨酸(Hyp)和ZnSO4制备Hyp-Zn(Ⅱ)配合物,研究其配合机制及抗氧化能力。与L-羟脯氨酸相比,配合物在1100cm-1处出现了一新的红外吸收峰,说明L-羟脯氨酸与Zn(Ⅱ)发生了配位作用;配合物的差热-热重图与L-羟脯氨酸相比,在290℃和375℃的吸热峰消失了,确证L-羟脯氨酸与Zn(Ⅱ)发生了配位作用;配合物核磁核磁共振图中3.5~3.9ppm的羧基氢和羟基氢的信号峰的消失,表明L-羟脯氨酸与Zn(Ⅱ)发生配合的位置是L-羟脯氨酸的α碳的羧基或γ碳的...


以神经氨酸酶为靶点的抗流感病毒先导化合物的发现

谢元超, 山东大学 发表时间:2014-05-19 博士

...部分:本课题组前期发现了一些具有中等活性的L-羟脯氨酸衍生物类NA抑制剂,在此基础上,我们根据五元环NA抑制剂的结构特征,继续对其进行研究。①将L-羟脯氨酸环上C-4位的羟基变为胍基,在吡咯环氮原子上引入疏水性基团:②在吡咯环氮原子上引入脒基,将L-羟脯氨酸环上C-4位的羟基变为氨基,通过对氨基的化学修饰,引入疏水基团;③在吡咯环氮原子上引入脒基,将L-羟脯氨酸环上C-4位的羟基变叠氮,利用Click反应引入三氮唑,得到三类新型化合物。体外抑酶试验显示,这些L-羟脯氨酸衍生...


聚氨酯预聚物接枝L-羟脯氨酸催化剂的制备和高温防腐节能示温涂料的研制

刘正堂, 兰州大学 发表时间:2011-05-24 博士

本文综述了L-脯氨酸、L-脯氨酸催化不对称反应、聚合物固载化L-脯氨酸的方法等;概述了高温防腐涂料、隔热涂料、耐高温基料树脂和示温涂料,以及项目研究的目的和意义。研究了以L-脯氨酸作为催化剂在二乙基2-(2-氰乙基)丙二酸合成中的应用,探索了以聚氨酯预聚物接枝L-羟脯氨酸催化剂的制备及在Michael加成反应中的应用;制备了高温防腐底层涂料、隔热涂料、封闭反射涂料和超温报警涂料,进行了实际应用试验。(1)以丙二酸二乙酯与丙烯腈为原料,以L-脯氨酸作为催化剂,通过迈克尔加成反...


α-酮戊二酸对L-羟脯氨酸产量的影响

蔡萌萌; 刘子强; 户红通; 陈宁; 徐庆阳, 中国酿造 2018年07期 , 期刊

微生物合成L-羟脯氨酸时需要α-酮戊二酸的参与,而细胞内α-酮戊二酸的含量有限,限制了L-羟脯氨酸的高效合成。因此该实验通过在L-羟脯氨酸发酵过程中外源添加α-酮戊二酸,来考察α-酮戊二酸对发酵菌体生长、L-羟脯氨酸产量、糖酸转化率和代谢流的影响。结果表明,α-酮戊二酸对菌体生长有一定的抑制作用,但在一定浓度范围内,外源添加α-酮戊二酸能有效提高L-羟脯氨酸的产量和糖酸转化率,当随糖流加5 g/L(初始发酵液)α-酮戊二酸时,L-羟脯氨酸产量能够达到最大值62.14 g/L...


分光光度法测定鱼皮中羟脯氨酸含量

郭恒斌; 曾庆祝; 闫磊; 王毳, 现代食品科技 2007年07期 , 期刊

采用分光光度法测定鱼皮(鱿鱼皮和狗鲑鱼皮)中的羟脯氨酸(Hyp)含量。结果表明:两种鱼皮中羟脯氨酸的含量分别为0.823%和2.247%,平均回收率分别为98.47%和98.39%,变异系数分别为1.65%和0.64%。该法重复性好,可信度高,可作为判定鱼皮中胶原蛋白含量的一个定量指标。...


脯氨酸-4-羟化酶在大肠杆菌中的密码子优化表达及对反式-4-羟脯氨酸生物合成的作用

刘合栋; 袁春伟; 张震宇, 生物加工过程 2014年06期 , 期刊

为了使脯氨酸-4-羟化酶基因在重组大肠杆菌中得到高表达,通过调整大肠杆菌密码子偏好性以及mRNA二级结构,使得脯氨酸-4-羟化酶基因得到优化。将优化后的脯氨酸-4-羟化酶基因插入含有色氨酸串联启动子的p UC19质粒,构建重组质粒p UC19-ptrp2-Hyp,并导入大肠杆菌BL21(DE3)中。在摇瓶水平,重组菌以L-脯氨酸为底物发酵8 h,可积累(0.492±0.034)g/L的反式-4-羟脯氨酸。在发酵罐水平,通过补料分批发酵来提高反式-4-羟脯氨酸的产量,当补糖速...


离子色谱法测定鱼鳞胶原蛋白中羟脯氨酸含量方法的研究

张怡评; 易瑞灶; 陈晖; 陈俊德; 陈思谨; 陆燕, 中国海洋药物 2011年04期 , 期刊

目的建立离子色谱法测定鱼鳞胶原蛋白中羟脯氨酸的含量,为工艺研究提供检测依据。方法采用Aminopac PA-10氨基酸分析柱,用积分安培离子色谱法测定鱼鳞中羟脯氨酸的含量。结果羟脯氨酸在0.32~32μmol.L-1(进样量25μL)的范围内呈良好线性关系(y=3.341 1x+1.0087,r=0.999,平均回收率98.25%,RSD=2.04% n=5)。结论所建立的方法稳定可行,可作为判断鱼鳞胶原蛋白含量的一个定量指标。...


氨基酸自动分析仪对乳制品中羟脯氨酸的测定方法研究

曾暖茜; 王洪健; 周兴起; 冯志强, 现代食品科技 2008年07期 , 期刊

本文用氨基酸自动分析仪测定乳制品中羟脯氨酸的含量,研究了样品预处理方法和仪器色谱分离条件,测得样品中羟脯氨酸的含量,可作为乳粉中是否添加动物胶原水解蛋白的依据,此方法灵敏度高,具有较好的准确度和重现性,添加标准的回收率为94.9%~105%。...


产顺式-4-羟脯氨酸枯草芽孢杆菌工程菌的构建及发酵优化

张博文; 陈可泉; 曹伟佳; 王昕, 食品工业科技 2017年13期 , 期刊

顺式-4-羟脯氨酸(CHOP)是一种重要的手性结构物质,可广泛用于药物以及香料制造。本研究为开发CHOP的生物合成方法,将来源于中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)的L-脯氨酸-4-羟化酶在枯草芽孢杆菌WB800N中实现了成功表达,构建获得了能够以L-脯氨酸为底物合成CHOP的工程菌株,进而对该菌株的发酵条件以及发酵组分进行了优化研究。结果表明:工程菌株的最适发酵温度为25℃,最适诱导剂浓度为1 mmol/L,最适发酵p H为5;在发酵体系中加入5 m...


猪皮中羟脯氨酸含量的测定

蓝蔚青; 王川; 李燕; 方欣; 王庆红; 周培根, 中国食物与营养 2006年10期 , 期刊

采用比色法测定猪皮中羟脯氨酸(Hyp),具有较好的稳定性和较高的回收率。猪皮经过脱脂与盐提处理后,羟脯氨酸的平均回收率达85.97%,其在猪皮中含量的平均值为23.18mg/g(羟脯氨酸/猪皮)。...


L-羟脯氨酸寡肽混合物的高效液相色谱分离与质谱分析

孙艳亭; 卢奎; 马丽; 曹书霞; 赵玉芬, 色谱 2007年04期 , 期刊

研究了三氯氧磷辅助下L-羟脯氨酸的成肽反应,建立了采用反相高效液相色谱-质谱/质谱联用技术分离鉴定羟脯氨酸寡肽混合物的方法,优化了L-羟脯氨酸寡肽混合物的色谱分离条件。实验以YWG C8柱(10μm,250mm×10mm)为分离柱,以乙腈-0.06%三氟乙酸水溶液(体积比为2∶98)为流动相进行等度洗脱,在正离子模式下对洗脱物进行了电喷雾电离串联质谱鉴定。结果显示,分离出的各组分分别为L-羟脯氨酸二肽、L-羟脯氨酸环二肽和L-羟脯氨酸三肽。...


重组大肠杆菌BL21(pUC19-Hyp)产羟脯氨酸的补料分批培养

袁春伟; 何艳春; 张胜利; 张震宇, 生物加工过程 2014年04期 , 期刊

... g/min恒速流加为最优,在发酵44 h时,羟脯氨酸的质量浓度达到最高,为42.50 g/L,脯氨酸转化率为81%,此时细胞干质量为21.33g/L,残糖质量浓度为0.17 g/L。L-羟脯氨酸含量与摇瓶发酵时的1.39 g/L相比,提高了大约30倍,比日本株式会社的发酵产量提高了1.50 g/L,发酵过程中糖酸转化率约为4.0∶1。发酵液中的氨基酸分析结果表明,除脯氨酸羟脯氨酸外的其他氨基酸质量浓度均低于0.1 g/L,发酵液中主要氨基酸为脯氨酸羟脯氨酸。...


高产反式-4-羟脯氨酸重组大肠杆菌的构建和发酵优化

刘合栋, 江南大学 发表时间:2013-06-01 硕士

来源于指孢囊菌的脯氨酸4-羟化酶,可直接在游离的L-脯氨酸的第4位上加羟基,生成反式-4-羟脯氨酸。为了使脯氨酸4-羟化酶基因在大肠杆菌中得到高表达并实现L-脯氨酸高效转化,根据大肠杆菌密码子偏好性,重新设计合成了脯氨酸4-羟化酶基因。经密码子优化后的脯氨酸4-羟化酶基因与初始基因序列比较,脯氨酸4-羟化酶基因密码子适用指数CAI从初始的0.3992调整为0.9941,接近于最优值1,且GC百分比含量降低至59.34%。利用软件预测初步优化的脯氨酸4-羟化酶基因mRNA二级...


分光光度法测定鱼皮中羟脯氨酸含量

郭恒斌; 曾庆祝, 食品研究与开发 2007年10期 , 期刊

采用分光光度法测定鱼皮(鱿鱼皮和狗鲑鱼皮)中的羟脯氨酸(Hyp)含量具有较高的准确度和精密度。采用该法测定两种鱼皮中羟脯氨酸的含量分别为0.823%和2.247%,平均回收率分别为98.47%和98.39%,变异系数分别为1.65%和0.64%。该法重复性好,可信度高,可作为判定鱼皮中胶原蛋白含量的一个定量指标。...


无外源脯氨酸发酵产反式-4-羟脯氨酸重组大肠杆菌的构建及发酵优化

胡丹丹; 王付才; 张震宇; 孙付保; 周邦炜, 食品工业科技 2015年20期 , 期刊

为实现无外源脯氨酸的条件下直接从葡萄糖转化生成反式-4-羟脯氨酸,本实验采用定点突变和基因共表达的方法构建重组大肠杆菌:首先对L-脯氨酸生物合成途径中的关键酶谷氨酸激酶进行定点突变E143A、K145A,以增强L-脯氨酸生物合成能力;然后引入脯氨酸4-羟化酶基因,通过两个基因的共表达可以实现从葡萄糖到反式-4-羟脯氨酸的连续转化,而不再需要添加外源L-脯氨酸。得到的L-脯氨酸生物合成能力增强的菌株在摇瓶阶段L-脯氨酸的产量可达到1.4 g/L;pro BA2与hyp双基因共...


毛细管电泳-激光诱导荧光检测肌腱和肌腱细胞中的羟脯氨酸

邹晓莉; 周春艳; 黎源倩; 曾红燕, 分析化学 2006年10期 , 期刊

...细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIF)分析羟脯氨酸的方法。肌腱和肌腱细胞中的胶原蛋白碱水解生成氨基酸,经异硫氰酸荧光素(FITC)衍生,采用LIF-CE分离测定胶原蛋白特异性氨基酸-羟脯氨酸羟脯氨酸在0.5μg/L~8×103μg/L浓度范围内线性关系良好;检出限为0.5μg/L。相对迁移率和相对峰高的相对标准偏差(RSD)分别为5.0%和6.1%。测定了60份肌腱和9份细胞样品,加标回收率为95%~110%。将所建立的毛细管电泳方法与高效液相色谱法(HPLC)进行比...


比色法测定鱼鳞中羟脯氨酸的研究

张俊杰; 曾庆孝, 食品科技 2004年04期 , 期刊

以比色法测定鱼鳞中的羟脯氨酸,具有较好的稳定性和较高的回收率,由氨基酸自动分析仪法验证此方法是可行的。鱼鳞经过脱钙处理,羟脯氨酸的保留率为96.19%,经过第一次提取胶原蛋白后,提取率达到了总胶原蛋白的70%以上,同样的条件下进行第二次提胶,胶原蛋白的提取率较低。...


产3-羟脯氨酸重组菌的构建及发酵优化

姚雪娜; 张震宇; 孙付保; 陈昶; 黄建华; 沈松, 食品与生物技术学报 2017年03期 , 期刊

顺式-3-羟基-L-脯氨酸(顺式-3-羟脯氨酸)可用于合成多种抗癌药物,具有重要的商业价值,目前大多通过添加IPTG来诱导表达脯氨酸-3-羟化酶,采用两步法生物合成顺式-3-羟脯氨酸。作者通过目的基因优化设计,引入强启动子色氨酸串联启动子(Ptrp2)来避免异源表达时的诱导剂使用,构建重组质粒p ES-Ptrp2-P3H,成功构建了重组大肠杆菌BL21(DE3)/p ET21a-Ptrp2-P3H,优化后的脯氨酸-3-羟化酶基因(P3H)改变了168个碱基,GC含量由原来的...


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